蜘蛛的天敵很多。蟾蜍、蛙、蜥蜴、蜈蚣、蜜蜂、鳥類都捕食蜘蛛，有的寄生蜂寄生於蜘蛛卵內，有的寄生蠅的幼蟲在蜘蛛卵袋中發育，小頭蚊虻昆蟲幾乎全部都是以幼蟲的形式寄生到蜘蛛體內。蜘蛛常用多種方法來禦敵，如排出毒液，隱匿，偽袋，擬態，維護色，振動等等。當逃不掉時，而自己的附肢被敵害夾持時，乾脆切斷自己的附肢一走了之，反正自斷的步足在蛻皮時還會再生。
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